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评估冠状动脉支架置入后血管再狭窄与P2RY2基因单核苷酸多态性的相关性的方法
发布者:ZhangYNRR 发布时间:2009年11月10日 来源:《中国组织工程研究与临床康复》杂志 |
△《中国组织工程研究与临床康复》杂志2009年第13期发表的新疆医科大学第一附属医院心脏中心作者王朝霞的文章“冠状动脉支架置入后血管再狭窄与P2RY2基因单核苷酸多态性的相关性”,文章应用病例-对照的方法分析冠状动脉支架置入后再狭窄患者P2RY2基因和支架置入后再狭窄的关系。 △实验中的操作方法: 第一步:按常规酚-氯仿抽提法提取支架置入后再狭窄组及对照组观察对象外周血白细胞的DNA,稀释DNA样本并用紫外可见分光光度计检测DNA浓度,保证各DNA样本浓度基本一致。 第二步:单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的选择及检测:人类P2RY2基因目前在NCBI数据库登记有104个单核苷酸多态性。文章筛选P2RY2基因的5个单核苷酸多态性,包括rs4944831(SNP1),rs1783596(SNP2),rs4944832(SNP3),rs4382936 (SNP4)和rs10898909(SNP5)。SNP1位于P2RY2基因的内含子,SNP2位于外显子的编码区,SNP3,SNP4和SNP5位于3’端的空白区。应用TaqMan法检测单核苷酸多态性,在ABI7000型实时定量荧光聚合酶链反应仪上先进行96孔板的绝对定量聚合酶链反应扩增, 反应液为:引物/探针混合液0.046 μL(其中每条引物浓度为331.2 nmol/L, 每条探针终浓度为73.6 nmol/L),聚合酶链反应混合液2.5 μL,基因组DNA 2 ng,加H2O至5 μL。反应条件为:95 ℃ 10 min预变性,92 ℃ 15 s, 60 ℃ 1 min(50个循环)。聚合酶链反应结束后,继续在同一96孔板上做等位基因分布检测,反应条件为:60 ℃ 10 min,保存记录结果。 △作者认为: 本操作方法区别于常规方法的特点:目前越来越多的基础研究显示,P2RY2基因在心血管系统中重要的调节作用,它不仅可以调节血管的收缩和舒张;促进血管平滑肌细胞、内膜细胞的生长以及再血管化;还可以引发血小板的聚集,调节凝血功能和炎症反应;同时,它还与心血管系统置入物的排斥反应相关。已有研究表明,人类P2RY2基因可能与冠状动脉支架置入后再狭窄的发生相关。 △提供值得他人借鉴的特点:冠状动脉内支架置入已成为治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的有效手段,但支架置入后的再狭窄问题依然是一个难题,因此从分子生物学角度来分析其发生机制及预防再狭窄引起了人们的关注。文章分析人类P2RY2基因单核苷酸多态性与冠状动脉支架置入后再狭窄的相关性,为进一步从基因角度探究冠状动脉支架置入后再狭窄的机制及防治提供一些线索,具有一定的应用价值。
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