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以Triton X-100和脱氧胆酸钠为萃取剂制备兔脱细胞神经基质:有最佳时间吗?

 发布者:LuoYLXSB  发布时间:2009年11月27日 
 
来源:CRTER

△    《中国组织工程研究与临床康复》(CRTER)杂志2009年47期发表的滨州医学院作者姜炜鹏的文章“以Triton X-100和脱氧胆酸钠为萃取剂制备兔脱细胞神经基质:有最佳时间吗?”文章中,应用Triton X-100和脱氧胆酸钠化学萃取剂处理新西兰大白兔的面神经,提出脱细胞神经基质制备的所需试剂剂最佳时间。
△    实验中的操作方法
第一步:作者于2009-02/06在滨州医学院附属医院口腔科学实验室将三四月龄新西兰大白兔15 只,体质量2.5~3 kg。取兔双侧面神经,在手术显微镜下去除神经表面的脂肪组织和神经外膜,将其分为每段10 mm长,共66条。将66条神经随机分成11 组,每组6条。除正常对照组外,其余10 组均放入培养皿中,先用蒸馏水室温下浸浴12 h ,以使细胞和髓鞘在低渗液体中膨胀,使部分细胞被胀破;然后将其中5组置于3% Triton X-100 12,24,36,48,60 h,室温下振荡,另外5组用3%Triton X-100和4%脱氧胆酸钠先后作用12h(为1个周期),室温下反复振荡1~5个周期。Triton X-100、脱氧胆酸钠由美国Sigma 公司提供。
第二步:主要观察指标为常规苏木精-伊红染色,光镜下观察去细胞程度及纤维管道结构的完整性。
第三步:结果发现单独应用Triton X–100处理神经即使作用60 h ,仍不能将神经中的所有细胞成分去除,且许旺细胞基底膜有较大破坏;Triton X–100配合脱氧胆酸钠处理处理2个周期,可有效地去除神经中的细胞成分及神经纤维髓鞘和轴突,保留完整的许旺细胞基底膜,周边可见神经外膜和束膜。因此,大白兔面神经经 Triton X–100和脱氧胆酸钠室温处理2个周期,并不停地振荡,可完全去除神经组织中的所有细胞成分,保留完整的许旺细胞基底膜,得到脱细胞的神经基质。
△    作者认为,本操作方法区有别于常规方法的特点:
①课题为山东省医药卫生科技计划项目(2007HW032)、山东省教育厅科技计划项目(J08LG16),对常用的试剂类型搭配及作用时间进行了研究,探索出了最佳试剂类型搭配及作用时间。
②虽然实验探索了制备新西兰大白兔面神经去细胞神经基质所需的试剂类型及作用时间,但仅限于低等哺乳动物的研究,对制备高等动物如灵长类来源的神经所需的试剂的类型、浓度及作用时间研究较少。虽然获得的去细胞神经支架在组织结构和成分上已经达到了相应的要求,但能否成为有效的神经缺损修复生物材料,仍需要进一步的临床应用加以验证。

 

 

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