徐  波，邓宇斌

中山大学中山医学院病理学与病理生理学教研室，广东省广州市  510080 
      
徐波★，男，1985年生，山西省太原市人，汉族，中山大学在读硕士，主要从事干细胞移植及心脑血管疾病方面的研究。

通讯作者：邓宇斌，博士，教授，中山大学中山医学院病理学与病理生理学教研室，广东省广州市  510080  

摘要
背景：内皮脂肪酶主要由血管内皮细胞分泌并作用于血管内皮，内皮脂肪酶可能在动脉粥样硬化等疾病的发生发展中起重要作用，但目前机制尚不明确。
目的：构建内皮脂肪酶慢病毒表达载体，产毒感染HepG2细胞，评价重组载体提高内皮脂肪酶表达的效果。
方法：RT-PCR调取大鼠内皮脂肪酶基因，SpeⅠ、Eco RⅠ双酶切后，将内皮脂肪酶基因插入慢病毒载体PRRL.sin.CMV.eGFP中构建内皮脂肪酶过表达慢病毒表达载体PRRL.sin.CMV.EL-eGFP；使用PRRL.sin.CMV.EL-eGFP质粒及病毒包装系统于293FT细胞中包装产毒，用于感染HepG2细胞，RT-PCR及Western blot检测感染后HepG2细胞内皮脂肪酶mRNA及蛋白的表达。
结果与结论：酶切及测序鉴定证实内皮脂肪酶基因成功插入PRRL.sin.CMV.EL-eGFP慢病毒表达质粒；转染PRRL.sin.CMV.EL-eGFP慢病毒表达质粒后，HepG2细胞中可见内皮脂肪酶mRNA及蛋白的表达。说明重组PRRL.sin.CMV.EL-eGFP慢病毒可感染HepG2细胞，并使其表达内皮脂肪酶mRNA和蛋白。
关键词：内皮脂肪酶；慢病毒载体；构建；表达；HepG2细胞
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.20.015

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