目前文献报道的大鼠门静脉动脉化模型有缝合法或支架法,2种方法在血管通畅率及操作便利性上均不太理想。
建立稳定的操作简便的大鼠门静脉动脉化动物模型。
技术方法:
同种异体血管的准备:大鼠取仰卧位,乙醚半开放麻醉,游离供体大鼠腹主动脉,在腹腔干水平以上1.5 cm处剪断腹主动脉,从离断处至左肾动脉所有的肋间后动脉或腰动脉用8-0丝线结扎切断,游离肠系膜上动脉,距肠系膜上动脉根部0.6 cm处离断,8-0丝线结扎切断腹腔干、右肾动脉及腹主动脉远心端。取下来的腹主动脉即为血管材料,置于4 ℃ UW液中保存5~7 d备用。在其近心端作一袖套。
实验分组及模型制备:从50只SD大鼠中随机抽取40只作为模型组,其余10只作为假手术组。
采用同种异体血管套入式缝合及袖套法建立大鼠门静脉动脉化模型。术前大鼠禁食12 h,不限饮水,乙醚半开放麻醉,体积分数0.5%碘伏消毒后行腹部正中切口,用棉签推移肠管至右侧,暴露左肾,湿盐水纱布覆盖右侧腹部。游离左肾动、静脉,近左肾门处结扎左肾动脉,切断左肾动脉并留一条丝线作牵引,继续游离左肾动脉至腹主动脉根部。同样在左肾门处结扎左肾静脉,并游离至下腔静脉根部。
将左肾动脉与左肾静脉牵引线穿过肠系膜拉至腹腔右侧。从阴茎背静脉推入2 mL液体 (1 mL乳酸钠林格液+1 mL 25 U/L肝素)。阻断夹阻断左肾静脉根部,剪断其断端,肝素水冲洗,并在其断端套入一袖套后结扎。将作好的同种异体血管材料的肠系膜上动脉断端借牵引线套入左肾动脉,借肠系膜上动脉的伸缩性紧套住左肾动脉,用10-0丝线在左肾动脉根部0点、4点、8点方向全层缝合3针以固定。动脉阻断钳阻断左肾动脉根部,提出左肾动脉断端剪断线结,肝素水冲洗。
游离大鼠门静脉第1属支处以下部分,结扎切断第2属支。阻断钳在门静脉第2分支处下0.5 cm位置阻断,紧贴门静脉第1属支下方固定一个阻断夹,在第2属支处切断门静脉,肝素水冲洗断端。依照袖套法将作好的血管材料的袖套端套入门静脉近肝门处断端,结扎固定。左肾静脉袖套套入肠系膜上静脉断端,结扎固定。松开所有阻断钳。
术毕腹腔灌入温生理盐水15~20 mL后棉球擦干。检查吻合口通畅性,腹腔内有无活动性出血点。腹壁用7号线全层连续缝合。记录手术时间及门静脉阻断时间。假手术组只切除左肾,游离左肾动脉及左肾静脉,游离门静脉至第2属支,阻断门静脉15 min后开放。术后自由饮水、进食,观察并称量大鼠的体质量。
磁共振血管成像:术后2周,模型组和假手术组分别随机抽取5只和2只大鼠,水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉后,于大鼠尾静脉插入留置针并固定,置入大鼠磁共振检查专用线圈后,从留置针注射2 mL钆喷替酸葡甲胺对比剂作磁共振血管成像。
肝功能测定:术后1个月,大鼠尾静脉采血,离心,取血清,在Olympus AU2700全自动生化分析仪上采用改良溴甲酚绿法测血清白蛋白,速率法检测血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和胆碱酯酶活性。
病理学观察:术后2个月,大鼠麻醉处死,开腹探查吻合口通畅情况。取大鼠肝脏,置于体积分数10%甲醛中固定,石蜡包埋,切片。行常规苏木精-伊红染色,倒置显微镜下观察并照相,观察大鼠肝脏的病理学改变。
结果与结论:
造模过程中有1只大鼠死亡,其余39只均存活至术后2个月,造模成功率为98%(39/40)。
术后1个月,模型组与假手术组大鼠体质量,血清白蛋白、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和胆碱酯酶差异均无显著性意义(P > 0.05)。
术后2个月,模型组门静脉通畅率为95%(37/39)。磁共振血管成像及病理结果均未见明显异常。
提示,利用同种异体血管套入式缝合及袖套法建立的大鼠门静脉动脉化模型操作简便、省时、成功率高,是一种可行、稳定、可靠、可重复性强的方法。
更多内容请见《中国组织工程研究与临床康复》杂志第15卷第15期
吴均政,江艺,张小进,吕立志.一种新的大鼠门静脉动脉化模型[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(15):2716-2720.