以往制备骨关节模型的方法成模时间较长。目的为建立一个理想的兔膝关节软骨缺损动物模型。
技术方法:
兔膝关节缺损的模型的建立:
用6 g/L戊巴比妥钠行耳缘静脉注射麻醉(麻醉剂量按30 mg/kg计算)。实验兔进入麻醉状态后,将其仰卧于手术台上,取其左侧后腿关节,予剃毛、常规消毒、铺巾。
取膝关节髌韧带内侧缘切口,3.0~4.0 cm,从髌韧带内侧进入,屈曲膝关节,将髌骨导向外侧脱位,暴露出股骨滑车部。
在股骨内髁滑车面用电动钻,先用直径2 mm的钻头初步定位,钻出小凹陷,然后换4.5 mm钻头在此基础上钻出直径4.5 mm、深3 mm的全层关节软骨缺损区,软骨下骨板被完全破坏,用生理盐水冲洗清除组织碎屑和血块,缺损部清理后,不作其他处理,行关节复位,逐层缝合,关闭膝关节。术后注射青霉素钠20万,1次/d,连续3 d,以防感染。
取材:于制模后2,6,12,18周,对实验兔行耳缘静脉过量麻药注射处死,每时间点4只,用手锯锯取实验侧股骨上髁,取材后,行大体、病理组织学观察标本。
病理组织学检查:将标本用体积分数为4%的中性甲醛液固定后,100 g/L甲酸脱钙,逐级乙醇脱水→石蜡包埋→切片→常规苏木精-伊红染色→显微镜下观察缺损部位细胞、纤维及软骨爬行情况并拍片,采用共聚焦显微镜观察其特征。
大体观察:观察缺损部位的修复情况。
结果:
实验兔后腿关节的股骨髁关节面的关节软骨缺损后,在制模后2,6周缺损部位凹陷明显,只有少许肉芽组织和纤维组织生长填充,未见软骨细胞爬行生长,12,18周见缺损部位以纤维组织增生为主,底部及边缘可见骨组织和软骨增生,但是镜下形态仍与正常软骨组织区别较大,表面仍未见软骨细胞爬行生长。
结论:实验建立的兔膝关节软骨缺损模型成模时间短,且缺损部位不能通过自我修复达到自愈。
更多内容请见《中国组织工程研究与临床康复》杂志第13卷第2期
梁佩红,叶春婷,康宁,杨小红,谭见容,戴丽冰,沈雁,王文,梁伟国,陈鸿辉.兔膝关节软骨缺损动物模型的建立[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,13(2):280-283