传统前交叉韧带重建造模腱骨界面愈合缓慢，造模时间较长。通过在腱骨界面注入以纤维蛋白胶为载体的重组人骨形态发生蛋白2复合物，建立造模周期更短、更完善的兔膝关节前交叉韧带重建动物模型。   

    rhBMP-2缓释复合物构建：将rhBMP-2 1 g和冻干纤维蛋白单体粉剂75 mg溶解于2 mL的磷酸二氢钾缓冲液中，将凝血酶粉剂溶解于2 mL氯化钙溶液中。分别抽取上述溶液放置于双联注射架中备用。通过推动联动推杆，即可将等量的2种组分经过1个复式注射座均匀混合，形成含rhBMP-2的纤维蛋白胶复合物，并通过注射头均匀注入胫骨及股骨骨隧道各1 mL，复合物于10 s左右凝固。

    分组及建模：42只兔共84条后腿，双侧膝关节均接受前交叉韧带重建手术，其余7只兔共14条后腿不作任何处理作为正常对照组，实验动物以完全随机方法分组，实验分组及取材时间见表1。

    切取兔自体半腱肌通过股骨、胫骨隧道重建前交叉韧带。需手术的模型组、纤维蛋白胶组和空白对照组实验动物经耳缘静脉注射体积分数2.5%的戊巴比妥钠溶液将动物麻醉，双膝术区备皮、消毒，行膝正中皮肤切口，向内侧游离，切取半腱肌，折叠成双股，3-0肌腱线编织缝合，见图1a。然后从髌旁内侧入路暴露膝关节，将髌骨拉至外侧，切断翼状皱襞，于上下止点处完整切除前交叉韧带，查前抽屉及Lachman试验阳性，分别以正常前交叉韧带附着点为标志钻取直径2 mm胫骨和股骨隧道，见图1b。用直针引导牵引线，将双股半腱肌肌腱自下骨道外口穿经胫骨和股骨骨隧道引出，股骨干远端平行钻2个骨洞，形成骨桥，牵引线穿过骨桥打结固定，下止点同样钻胫骨骨桥，于屈膝30o拉紧，打结固定，见图1c。

    查前抽屉及Lachman 试验阴性后，逐层间断缝合切口。患肢不固定，前3 d肌注青霉素抗感染。根据实验分组不同分别在模型组腱骨界面植入rhBMP-2和纤维蛋白胶复合物，纤维蛋白胶组腱骨界面植入纤维蛋白胶，空白对照组腱骨界面不植入任何材料。正常对照组不作手术处理。

    形态学观察：分别于术后第2，4和8周各处死实验动物取材，进行前交叉韧带大体观察，并观察术后动物饮食，活动及伤口愈合情况，注意有无炎症反应，局部有无化脓性感染，步态及关节活动度。

    生物力学检测：正常对照组7只于行生物力学检测前处死取材。模型组和对照组分别于术后第4和8周取材，每组各处死7只实验动物。保留股骨远端和胫骨近端各约3 cm，切除除重建前交叉韧带外所有软组织及缝线，-80 ℃保存。实验前解冻，用自制恒压式横截面积测量韧带中部横截面积，压力为0.12 MPa，压力时间为 2 min。去除股骨内髁，用桶形卡具加横行钢钉固定兔胫骨和股骨，屈膝30o，调节复合体和卡具的位置，使拉力经过韧带的轴线，测量重建韧带初始长度，应用MTS858生物材料测试机做拉伸试验。拉力达到2.0 N时用游标卡尺测量韧带长度。先行预处理，拉伸速度0.5 mm/s，拉长0.5 mm，共3次，然后行拉断试验，拉伸速度为500 mm/min，试验机绘出载荷-位移曲线。因为所有样本的骨隧道直径相同，移植肌腱的长度也非常相近，因此各组样本的最大载荷和刚度无需要使用隧道长度来标准化，可以直接取其绝对值做比较。 

    结果与结论：模型组最大载荷和刚度在术后4和8周与纤维蛋白胶组和空白对照组相比均增强(P < 0.01)。由此可见，实验成功建立了双侧前交叉韧带重建动物模型，以纤维蛋白胶作为载体的重组人骨形态发生蛋白2可以在术后早期提高腱骨界面的最大载荷和刚度，促进了腱骨界面的愈合，缩短了重建动物模型的实验周期。

    更多内容请见《中国组织工程研究与临床康复》杂志第15卷2011年第2期 

    张力，田京，唐银丽，闵少雄. 膝关节前交叉韧带重建兔模型的建立[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(2):228-231.