对于一些药物研究，小鼠是理想的造模工具，但由于小鼠耐受性相对较差，肾脏及肾蒂小且难于寻找，容易增加实验误差，导致造模失败。探讨BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立方法，评价肾脏缺血时间对肾缺血再灌注损伤的影响。

    动物分组：31只小鼠根据肾缺血时间不同随机分为：0 min组对照组(n=4)、30 min(n=8)、35 min(n=8)和45 min (n=11)3个实验组。另取26只小鼠观察肾缺血45 min生存率，随机分为  0 min对照组(n=4)和45 min实验组(n=22)。

    手术程序：小鼠术前8~12 h禁食，应用三溴乙醇溶液(200 mg/kg)经腹腔内注射麻醉。实验组：沿腹正中线做1.5~2.0 cm的切口，逐层分离皮肤、腹膜，进入腹腔，将肠道推向一侧，找到肾蒂后用无损伤微型动脉夹迅速阻断左右肾蒂，可见肾脏由鲜红变紫黑色，表示夹闭成功，按分组不同持续夹闭肾蒂不同的时间，去除动脉夹，恢复血流灌注，可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红，恢复原来颜色，术毕分层缝合关闭腹腔。术后小鼠于24~29 ℃的环境保暖，补充水与饲料。术中应用生理盐水使小鼠保持充分的水化。对照组：同法打开腹腔并找到肾蒂，但不夹闭肾蒂。

    模型成功与否判定：

    造模成功：术中夹闭双侧肾蒂后，可见肾脏由鲜红变紫黑色，去除动脉夹，恢复血流灌注，可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红，恢复原来颜色；并且术后1~3 h，可见小鼠苏醒，逐渐恢复正常活动。

    造模不成功：肾脏恢复血流后5 min，肾脏未恢复正常颜色；或术中损伤周围组织或器官；或术后1~3 h，小鼠未苏醒或死亡。

    血清生化指标检测：肾脏灌注后24 h，经眼眶内眦静脉丛取血0.3~0.5 mL，4 500 r/min  10 min离心后吸取血清，检测肌酐和尿素氮。

    肾脏病理组织学检测：肾脏灌注后24 h，引颈法处死小鼠，取出肾脏，行纵轴冠状面切开，置于体积分数为10%中性甲醛溶液中固定，石蜡包埋，制作4 μm切片，常规苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察肾小管坏死情况。每只小鼠肾脏切片随机选取20个视野观察，根据肾小管坏死程度，采用Rabb等的半定量病理评估法评分[5]：评分越高说明肾小管坏死越严重(最高4分)，0分：正常肾脏；1分：最少坏死(< 5%的肾小管坏死)；2分：轻度坏死(5%~25%的肾小管坏死)；3分：中度坏死(25%~75%的肾小管坏死)；4分：重度坏死(>75%的肾小管坏死)。

    生存率观察：肾缺血45 min生存率观察小鼠造模成功后不处死动物，每天定时观察和记录实验动物活动情况，至术后1周，记录动物的死亡时间。

    结果与结论：模型成功率95.9%，与对照组相比，肾缺血30 min组、35 min组和45 min组再灌注后24 h血清肌酐、尿素氮和肾脏病理组织学评分均升高，肾缺血45 min组生存率明显下降，差异均有显著性意义(P < 0.05)。结果提示，应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法可制备稳定肾缺血再灌注损伤模型，雄性小鼠肾缺血35~45 min是造模较为理想的肾缺血时间，所得模型效果满意。

    更多内容请见《中国组织工程研究与临床康复》杂志第15卷2011年第5期 

    胡红林，王共先，邹丛，习小庆，史子敏. BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立与评价[J]. 中国组织工程研究与临床康复，2011，15(5):870-873