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骨组织工程脱细胞骨基质的制备为何常用酶消化法 | 发布者:LiWWZXB 发布时间:2011年8月30日 点击率: | | 关键词: | | | 来源: | |
骨组织工程中,常用的脱细胞方法主要为酶消化法、渗透溶液法和去污剂清洗法。
酶消化法是利用酶的消化作用破坏细胞膜和细胞器,使细胞与基质分离,从而达到脱细胞目的。常用的酶有胰蛋白酶、中性蛋白酶、DNAse 和RNAse。
渗透溶液法是借助细胞内外渗透压的差别,破坏细胞膜,使细胞与基质分离,从而获得脱细胞基质。渗透溶液法分为高渗、低渗两种方法,有研究证实高渗溶液法比低渗溶液法更为有效。
去污剂清洗法最常用的试剂为在溶液中稳定性强的Triton X-100,它属于非离子型表面活性剂,能与细胞膜中的磷脂结合形成复合物,溶解于溶液中,并且其疏水端可以和膜蛋白结合破坏细胞膜,从而溶解破坏细胞。酶消化法脱细胞彻底,但对基质破坏作用强,不利于细胞外基质的保留;渗透溶液法简单、方便,但脱细胞能力有限;非离子型去污剂Triton X-100 作用温和。所以,要获得较理想的脱细胞效果,往往需要多种方法联合应用。
其他:运用经典的联合脱细胞方法制备ABECM。
用15%的过氧化氢和90 %的乙醚脱细胞。
用改良联合脱细胞方法制作脱细胞骨基质,并将其与兔骨髓基质干细胞复合成功修复兔桡骨中段骨缺损。
利用表面脱钙骨基质明胶(SDBMG) 修复大块骨缺损的实验中,X 线片显示SDBMG术后密度逐渐增高,自体骨则先降后升的现象,表明天然骨支架材料植入动物体内先脱钙吸收后成骨的变化特点,可在最大限度保存ABECM 力学性能的前提下部分脱钙在体外完成,植入体内后,较快进入成骨阶段,从而提高骨修复能力。
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