成骨指标检测：

碱性磷酸酶(ALP／AKP)是成骨细胞分化成熟早期的标志性酶之一，其活性高低一定程度上可以反映出细胞的成骨分化能力。

钙结节是骨膜细胞成骨化过程中形成的结节，是骨膜细胞成骨化的重要标志。分别在5、10、15、20 d时取出细胞爬片．进行成骨细胞标志物碱性磷酸酶(ALP试剂盒法)及钙结节(Von Kossa染色法)染色检测。

(1)ALP试剂盒染色方法：

①取出新鲜细胞爬片滴加固定液，室温固定3 min．水洗。

②滴加作用液数滴，玻片置湿盒内，加盖疏水膜，避光于37。C孵育15 min，水洗。③趁湿滴加苏木素复染液数滴，复染3 min。水洗，镜检。显微镜下观察阳性细胞核呈紫色，胞浆中出现蓝紫色颗粒。

阳性细胞计数方法：实验组和对照组每张盖玻片均随机取3个视野，采用网格计数法，计算阳性细胞百分率。

(2)Yon Kossa钙结节染色方法：

①PBS冲洗2次，每次3 min。

②多聚甲醛固定8 inin。

③蒸馏水冲洗2次。④5％硝酸银紫外下照20 min。⑤蒸馏水冲洗2次。⑥入2％硫代硫酸钠5 min。⑦水洗封片，镜检。显微镜下观察阳性细胞染色呈棕黑色．没有钙沉积则不显色。阳性细胞计数方法：每张盖玻片随机计数100个细胞．采用网格计数法。分别计算对照组和实验组的钙结节阳性率。

快速投稿及咨询电邮：crter04@crter.org