成骨细胞的获取和培养：

在无菌条件下，取2周龄新西兰幼兔的额骨和顶骨，去除骨膜和附着的软组织，用手术刀将骨片切成2 mmx2 mm碎片，洗涤，

用1：1的2．5 g／L胰蛋白酶和1 g／L胶原酶于37℃消化30 min，终止消化，1 200 r／min离心5 min，弃上清夜，用含体积分数为0．1的小牛血清DMEM培养液悬浮细胞，并接种于培养瓶中，于37℃恒温，体积分数为0．05的CO：、饱和湿度的细胞孵箱中培养。

以上步骤重复3次，每二三天更换培养液，待原代成骨细胞增殖、贴壁、融合成单层后，收集细胞分瓶传代。

成骨细胞与支架材料体外培养：将单纯生物衍生骨材料和胶原生物衍生骨材料分别在培养液中浸泡48 h，然后置入6孔板中，每块材料中加入lxl010 L．1的细胞悬液20 L，4-6 h 后加入培养液5．0-6．0 mL，48 h换液，将细胞与材料共同培养7 d。

随培养时间的延长，生物衍生骨与胶原生物衍生骨组细胞数量均逐渐增加，从细胞计数看，细胞附着后可保持长时间的分裂增殖，随培养时间的延长细胞数量增加，胶原生物衍生骨材料组细胞数量增加较快。

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