基因治疗视神经损伤的载体工具有哪些?

发布者:lianzznrr  发布时间:2012年1月3日 来源:谷歌

慢病毒载体(1entiviral vector,LV): van Adel等研究发现,使用编码CNTF基因的LV转染RGCs,可延长RGCs的存活时间,在新生动物LV载体可有效转染RGCs,转染后基因能稳定表达数周,但在成年动物的眼内转染效率较差。同时还存在转染特异性的问题,将可表达绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein,GFP)的LV注射到眼内,可发现被转染的细胞多位于视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)层。以及巩膜、结膜和脉络膜中。

腺病毒载体(adenoviral vector,AdV): AdV是无被膜、线性、双链的DNA病毒,能适应8 000 bp的DNA。大多数类型的细胞对腺病毒都很敏感,该载体可将转基因传递到分裂和不分裂的细胞内。使用该病毒转染RGCs,细胞内转基因表达和分泌的相关蛋白,短期内都能增强RGCs的存活。AdV编码的抗细胞凋亡蛋白Bcl-XL在横断视神经的表达,减少了轴突横断后10~14 d内RGCs的死亡,但使用AdV过度表达Bcl-XL,不会诱导横断的视神经再生出新轴突。

腺相关病毒载体(adeno—associated viral vector,AAV): AAV是无被膜单链病毒,来源于细小病毒组,有自然复制缺陷,一般被认为无毒无致病作用,视网膜注射AAV载体可有效转染各种不同类型的细胞,并有持续数月高水平的转基因的表达,因此是当前使用最广泛的载体工具。目前已知有超过100种的AAV分型,其中有11种已被设计成重组病毒载体,使用最多的主要是亲和神经元的分型。AAV-2和AAV-5是眼部最常使用的载体,但以AAV-2居多。AAV-2可转染光感受器、RPE细胞和RGCs;AAV一1~AAV-4只能转染RPE细胞;AAV一5和AAV一2/5可转染光感受器和RPE细胞,但不能转染RGCs;而AAV.2/8比AAV.2/5能更有效地转染光感受器和RPE细胞。

尽管可插入AAV的大多数基因对治疗眼部疾病都有帮助,但只能插入约4 500 bp的DNA,这是AAV载体使用的一个缺陷。而AAV对RGCs的转染会因转染基凶的不同而不同,若转染基因编码的是非分泌性的抗细胞凋亡蛋白或是可阻断或活化细胞信号途径的蛋白,那么转染的RGCs就会相对多一些。

 

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